流式細胞儀是一種用于執(zhí)行稱為流式細胞術(shù)的測量方法的設(shè)備。
該測量涉及將激光束照射到流動液體樣品中的細胞上,檢測細胞發(fā)出的散射光和熒光,并測量細胞大小、數(shù)量以及細胞內(nèi)和表面抗原等特征。
流式細胞儀與熒光顯微鏡相比具有優(yōu)勢,例如能夠同時定量多個測量項目,分析速度快。另一方面,流式細胞儀不適合觀察細胞的形態(tài)特征。
流式細胞儀廣泛應(yīng)用于涉及細胞、臨床測試和治療的生物和醫(yī)學研究??梢詼y量多種類型的細胞。我們分析外周血白細胞以進行疾病診斷,并分析稀有細胞,例如培養(yǎng)的動物細胞、植物細胞、成體干細胞和腫瘤起始細胞,以對其進行表征。
其他測量對象包括微生物、浮游生物等海洋生物、精子、酵母和乳膠珠。
流式細胞儀主要由流路系統(tǒng)、光學系統(tǒng)和電氣系統(tǒng)三部分組成。流道系統(tǒng)具有吸入樣品并將其流入流通池的功能,流通池被來自光學系統(tǒng)的激光照射,該光學系統(tǒng)由光源、透鏡、濾光片和產(chǎn)生光電流的檢測器組成。
然后,該系統(tǒng)檢測細胞發(fā)出的熒光,并使用電氣系統(tǒng)對其進行分析。流路系統(tǒng)由管道、閥門和泵組成,用于將樣品中漂浮的熒光標記細胞排列在一條線上進行分析。
當激光穿過細胞的被稱為詢問點的部分時,光被散射,同時通過激發(fā)與細胞結(jié)合的熒光染料而發(fā)射熒光,并且該散射光和熒光被裝置檢測。它作為一個信號。散射光有兩種類型:前向散射光信號(FS)和側(cè)向散射光信號(SS)。
使用不同的檢測器檢測FS和SS,F(xiàn)S反映細胞大小,SS反映細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)。檢測到的信號在電子系統(tǒng)中轉(zhuǎn)換成數(shù)據(jù),最終可以由軟件解釋。
流式細胞儀分為兩種類型:細胞分析儀和細胞分選儀。細胞分析儀是分析細胞的設(shè)備。包裹在鞘液中的樣品液中的細胞通過流通池一一排列并流過檢測部分。在那里照射激光,通過檢測光散射和熒光來分析細胞。
細胞分析儀專注于分析,因此簡單易用。除了細胞分析之外,細胞分選儀還可以分選出所需的細胞。除了分析細胞結(jié)構(gòu)、大小和比例之外,還可以檢查細胞分布并對細胞進行高速分類。
待分選的目標細胞被賦予正電荷或負電荷,并形成液滴。只有帶電的目標細胞液滴被施加電壓的偏光板轉(zhuǎn)移并收集到試管或微管中。細胞分選儀的操作比細胞分析儀更復雜,并且需要更多的技能。
流式細胞術(shù)中使用的細胞檢測抗體包括多克隆抗體和單克隆抗體。多克隆抗體是從用抗原免疫動物后收集的血清中純化的抗體。該抗體是識別并結(jié)合多個表位(抗體結(jié)合部分)的抗體混合物。
為了生產(chǎn)單克隆抗體,需要給動物提供抗原并進行免疫,然后攜帶抗體的 B 細胞與骨髓瘤(癌細胞)融合。從所得雜交瘤中分泌的抗體是單克隆抗體。該抗體僅識別一個表位。
從提高實驗準確性和目標物質(zhì)(抗原)檢測的特異性的角度來看,流式細胞術(shù)用的抗體大多是單克隆抗體。
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